摘要：本文展示了2024年9月中检院单抗室在《Electrophoresis》和《Journal of Chromatography A》期刊新发表的两篇文章，分别对多种半胱氨酸偶联的抗体-药物偶联物（cysteine-conjugated antibody-drug conjugate, cys-ADC）进行详尽表征，尤其集中于电荷异质性分析的研究结果。

前言：这两篇文章均以cys-ADC为研究对象。这类产品通过可裂解连接子将细胞毒性药物连接至单克隆抗体，依赖单克隆抗体精确定位靶细胞（通常为癌细胞）。在内吞作用后，连接子在细胞内裂解，释放出细胞毒性药物，实现精准杀灭靶细胞，同时显著减少高细胞毒性药物带来的副作用。本研究讨论的cys-ADC在偶联过程中，单抗轻重链间的二硫键部分还原，暴露出自由巯基用于小分子药物的偶联，轻重链间仅凭非共价力结合，因此采用非变性质谱（native MS）技术广泛应用于cys-ADC的表征。

工作亮点：这两篇文章的突出亮点在于成像等电聚焦毛细管电泳（Imaged Capillary Isoelectric Focusing, icIEF）与非变性质谱技术的结合，揭示了cys-ADC电荷异质性的重要性。cys-ADC产品结合了多种翻译后修饰，如糖基化、脱酰胺和氧化等，此外，药物的偶联进一步增加了其异质性。传统的液质联用技术对其电荷变异体的分离能力有限。然而，icIEF的不同分离原理，能从另一个角度有效促使ADC的电荷异质体分离，并借助基于Orbitrap平台的高灵敏度非变性质谱技术对各个电荷异质峰进行在线完整蛋白分子量测定。

结果与讨论：研究人员首先以NIST mAb标准品进行了icIEF native MS方法开发，通过使用Advanced Electrophoresis Solutions Ltd（AES）的CEInfinite自动化制备icIEF系统和Thermo Scientific™ Orbitrap™ Exploris™ 240超高分辨质谱仪进行分析。这一icIEF系统具备分析型、直连型和离线分馏收集等多功能，适配质谱仪，无需额外购买独立的离子源接口。AEstyle系列两性电解质则能实现高分辨率的电荷异质体分离，且对质谱的污染较小。Orbitrap Exploris 240的高灵敏度和高质量精度有助于发现并准确鉴定低丰度的组分，这在非变性质谱条件下的完整分子量分析尤为关键，因为在这些条件下，蛋白的带电量减少，质谱响应随之降低。

结论：两篇文章强调了创新icIEF-native MS技术在cys-ADC电荷异质性分析中的重要贡献。这项技术不仅能广泛应用于具有非共价相互作用分子的电荷异质性分析中，为组分鉴定提供全面的完整分子量信息。此外，对于有合规需求的客户，尊龙凯时的变色龙软件亦能够满足相关需求，为客户的日常实验提供极大便利。

参考文献：
[1] Zhang, X., Wu, G., Du, M., Bo, T., Chen, T. & Huang, T. (2024). Imaged Capillary Isoelectric Focusing Coupled to High-Resolution Mass Spectrometry (icIEF-MS) for Cysteine-Linked Antibody–Drug Conjugate (ADC) Heterogeneity Characterization Under Native Condition. Electrophoresis, 45: 1915-1926.
[2] Gang Wu, Xiaoxi Zhang, Xin Wang, Jialiang Du, Meng Li, Gangling Xu, Min Du, Chuanfei Yu. In-depth characterization of a cysteine-linked ADC disitamab vedotin by multiple LC-MS analysis methods and cutting-edge imaged capillary isoelectric focusing coupled with native mass spectrometry. Journal of Chromatography A, Volume 1736, 2024, 465353, ISSN 0021-9673.